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上海应用技术大学

实 验 报 告

课程名称 仪器分析 实验项目 紫外可见分光光度法测定维生素C含量 姓名 徐某某 学号 ***09 班级（课程序号） *** 实验日期 2022.4.14 指导教师 赵某某 成绩

实验名称:紫外-可见分光光度法测定维生素C含量

一、实验目的

1. 了解紫外可见光谱法测定未知化合物含量的原理和方法。

2. 了解和掌握（屹谱U-T6或UV-1800PC-DS2）型紫外分光光度计的使用。

二、实验原理

在紫外及可见区电磁辐射的作用下，多原子分子的价电子发生跃迁，从而产生分子的吸收光谱。各种物质的分子都有其特征的吸收光谱，以此来获得定性信息。而在选定波长下测量吸光度与物质浓度的关系，可对物质进行定量分析。吸收的大小可用光的吸收定律即朗伯比尔定律来描述：A=?lgT=lg(

??

0

/

??

??

)= εbc

利用紫外吸收光谱进行定分析时，必选选择合适的测定波长。可以待测物的吸收曲线为选择依据，在不存在干扰的情况下，一般选择最大吸收波长max为定量分析的测定波长。 维生素C对于人体骨骼及牙齿的构成极为重要,能阻止及治疗坏血症，又能刺激食欲，促进生长，增强对传染病的抵抗能力，是人体必需的营养之一。维生素C又名丙种维生素及抗坏血酸，其结构式为：

维生素C易溶于水，不溶于有机溶剂。桔类、番茄、马铃薯、绿叶蔬菜等含有丰富的维生素C。维生素C在紫外可见区有很强的吸收，故可以用紫外可见光谱对其进行定量分析。

三、仪器和试剂

（一）仪器

1. 紫外可见分光光度计（屹谱U-T6或UV-1800PC-DS2）；配1cm石英比色皿2个；

2. 容量瓶：25 mL 8个；

3. 移液管：10 mL 2支

4. 烧杯：50mL 1个；玻棒、洗耳球、洗瓶

（二）试剂

1.维生素C标准储备液（100 μg/mL，临用前配制）准确称取一定量的抗坏血酸，溶解于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于1000 mL容量瓶中。

2.维生素C未知液（稀释后约12~16μg/mL，原始浓度60-80μg/mL）

四、实验内容

1.吸收池配套性检查 石英吸收池在220 nm装蒸馏水，以一个吸收池为参比，调节T为100%，测定其余吸收池的透射比，其偏差应小于0.5%，可配成一套使用，记录其余比色皿的吸光度值。

2.维生素C标准溶液的配制 分别吸取0.0mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL维生素C储备液（100μg/mL）于25mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待用。

3.维生素C吸收曲线的绘制 取标准系列溶液浓度为16μg/mL的样品，以无水乙醇为参比，在220 ~320 nm波长范围扫描，得维生素C吸收曲线，并确定最大吸收波λmax。

4.维生素C标准曲线的绘制 将标准系列溶液按浓度从小到大依次排列，在上述最大吸收波长处进行吸光度的测定（以试样的溶剂为参比），根据浓度和吸光度的数值，绘制标准曲线。

5.未知液的测定确定未知液的稀释倍数（使吸光度A的数值保持在0.2~0.8之间），取一定体积的未知溶液于25 mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。在相同实验条件下测定未知液的吸光度。根据待测溶液的吸光度，在标准曲线上读出其浓度，并根据稀释倍数，确定未知样品的浓度。

五、数据记录与结果处理

1.维生素C吸收曲线的绘制

λ/nm

220

230

240 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 这个体系来做参比。

2.什么是标准曲线？它和吸收曲线有什么区别？

在某特定波长下,用分光光度计测量一系列不同浓度的标准溶液的吸光度,然后以浓度为横坐标,对应的吸光度值为纵坐标所绘制的曲线,称为标准曲线。

吸收曲线和标准曲线的区别：吸收曲线表示同一溶液对不复同波长的吸光度，找出最大吸收波长。便于用制最大吸收波长作为吸收光进行定量，减小误差。标准曲线是需用已知浓度的标准溶液才能绘制。吸收曲线又称为共振吸收曲线，在原子核物理中表示指入射粒子被靶核吸收的概率，随着入射粒子的能量变化形成的曲线。因为吸收概率又称为吸收截面。

心得

要使用石英比色皿，实验结束时，先关氚灯，再关主机电源开关。

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