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华中师范大学学生实验报告

姓名 华某某 学号***57 年级专业及班级 2019级3班 成绩_______

课程名称

动物生理学实验

实验名称

水迷宫技术检测侧脑室注射LDN对小鼠空间学习记忆的影响



实验目的

熟悉小鼠侧脑室定位注射步骤，了解脑立体定位仪的工作原理

掌握小鼠侧脑室立体定位注射的方法和步骤

掌握水迷宫技术检测小鼠空间学习和记忆能力的工作原理和操作步骤

了解泛素C末端水解酶L1活性抑制对小鼠学习和记忆能力的影响及作用机制



实验原理

学习与记忆是动物和人大脑的高级生理功能之一。Morris水迷宫技术（Morris water maze, MWM）是英国心理学家Morris于20世纪80年代初设计的用于检测啮齿类动物空间认知能力的经典行为学实验方法。

小鼠在水迷宫环境中会本能地寻找隐匿在水面下的逃逸平台，该行为涉及到复杂空间学习和记忆的形成与巩固过程，包括收集与空间定位有关的视觉信息，以及对这些信息进行整合与处理的过程。泛素C末端水解酶L1（Ubiquitin Carboxy-terminal Hydrolase L1,UCH-L1）缺陷可以导致啮齿类动物的空间认知功能障碍。本实验结合脑立体定位注射、水迷宫和生物设计学技术，检测侧脑室定位注射UCH-L1特异性抑制剂LDN对小鼠空间学习与记忆能力的影响。



实验对象、实验设备与材料

1. 实验对象：成年雄性XX小鼠

2. 实验设备：天平、大量杯、注射器、小鼠立体定位仪、笔、动物实验手术器械、微量进样针、金属探针、鼠笼、水迷宫装置、水迷宫图像自动采集系统、计算机ANY-maze系统（软件分析系统）、棉球、75%酒精棉球

3. 实验材料：0.48%戊巴比妥钠（0.02ml/1g体重）、碘伏、30%过氧化氢溶液、1mM LDN、二甲基亚砜（DMSO）



实验步骤及原始数据记录

1、 小鼠腹腔麻醉：称重，按0.02 ml/g腹腔左下部位注射0.48%戊巴比妥钠麻醉小鼠，用镊子夹动尾部或腿部，小鼠不再抖动则麻醉完全，麻醉完全可进行后续实验

2、 固定与剪毛：使用立体定位仪固定小鼠，镊子撬开嘴巴压鼻环固定，耳杆伸入小 鼠外耳道

3、 手术：手术弯剪剪去头部上方鼠毛，碘伏消毒。用镊子夹起两耳正中皮肤，纵向剪出大约2 cm口子，30%过氧化氢溶液创面消毒。

4、 侧脑室定位注射药物：标记十字架状前囟中点，用微量进样器吸取2微升LDN，固定在三维操纵杆上，将针头定标于前囟位置。前囟后移2.0 mm,右旁开1.5 mm，定位侧脑室，金属探针垂直向下钻透颅骨开孔。微量进样器穿透颅骨，向下进针2.0 mm进入侧脑室。开始给药，缓慢转动微量进样器，持续2~5分钟，其中每间隔1分钟左右暂停，使药物缓慢渗入侧脑室，时刻注意小鼠状态。结束后，缓慢旋出，从适配器上取下小鼠。

5、 小鼠伤口缝合：创面碘伏消毒，使用手术缝线、弯针、镊子，采用间断缝合方法缝合伤口。将小鼠侧卧置于鼠笼中，注意小鼠状态，保持局部环境温度与室温相同。

6、 水迷宫参数设置：进入Morris水迷宫系统，设置参数，对水迷宫进行区域划分命名、设定实验分组等

7、 Morris水迷宫行为学检测：一个小组同学操作计算机，另一组同学在水迷宫图标处轻柔地进行小鼠投放。若60 s内小鼠未找到平台，则潜伏期记为60 s；若找到平台

并停留3 s以上，则潜伏期为进入到该时间点时长。小鼠找到平台后，使其停留30 s作为平台认知学习过程。结束训练。每只小鼠每天从四个图 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 实操能力要求较高，从探针的移动到侧脑的定位，是以mm为单位进行操作，穿透颅骨也是很小的长度，难以把控，整体实验有一定难度，虚拟实验降低了失败率和对材料的耗费，也对我们的知识拓展有较大作用。但是虚拟实验平台本身还有些不太方便，画面显示不全，需要不断拖拽进行下一步，有些不太流畅。还有就是自身做完实验，可能有一些不太重要的细节问题不太懂，所以感觉还是需要和线下课堂结合起来或者是和老师们线上交流。虚拟实验平台整体来说带来了很多便捷之处。



实验报告填写要求：学生课前填写好实验预习部分（实验目的、实验原理和实验设备），无预习，不允许做实验。实验完成后填写实验步骤及实验原始数据，并进行实验结果分析。

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