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新冠病毒核酸检测标准操作规程

项目名称

新冠病毒核酸检测（荧光 PCR 法）

检测目的

根据《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南》，规范本中?新型冠状病毒感染的肺炎的检测?法。

适?范围

体外定性检测新型冠状病毒感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要进?新型冠状病毒感染诊断或鉴别诊断者的?咽拭?、?咽拭?和痰液样本检测。

职责

4.1检测?员：负责按照本检测细则对被检样品进?检测；

4.2复核?员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进?复核；

4.3科室负责?：负责对科室综合管理和检测报告的签发。

检测依据

《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南》

操作程某某

6.1实验前准备

6.1.1检测?员进?污染区前，必须穿好?次性防护服、?次性帽?、N95?罩、双层?套、?次性靴套、护?镜、防护?屏不得将与实验?关物品带?实验室。

6.1.2调节室温?20-25℃，湿度20-80%。

6.1.3检测试剂在室温平衡半?时；并检查试剂是否在有效期内。

6.1.4检查仪器是否正常，做好检测前准备?作。

6.1.5开启实验室污染区?物安全柜

6.2实验?法见试剂说明书

【检验?法】

6.2.1试剂准备（试剂准备区）

从试剂盒中取出核酸扩增反应液、酶混合液、ORF1ab/N反应液，室温融化，充分振荡混匀后瞬间离?。

计算试剂使?份数N（N=样本数+1管阳性对照+1管阴性对照），根据下表配置反应体系，加??适当体积离?管中，充分振荡混匀后瞬间离?，按20μL分装?PCR 反应管中，并转移?样本处理区。

组分名称加?体积（μL）/?份

核酸扩增反应液12

酶混合液4

ORF1ab/N反应液4

总体积20

6.2.2样本处理（样本处理区）

①核酸提取：待测样本、阳性对照及阴性对照按照核酸提取试剂盒说明书进?操作。

②加样：在上述准备好的PCR反应管中分别加?待测样本核酸、阳性、阴性对照各5μL，终体积为25μL/管，盖紧管某某，瞬时离?。

6.2.3PCR扩增检测（核酸扩增区）

①将PCR反应管置荧光定量PCR仪扩增检测。

插上仪器电源线，打开仪器背部的电源开关，仪器开机初始化。等待?指?灯停?闪动，变成稳定绿?，进?下?步操作。

②打开电脑桌?qsoft4.1软件，进?qsoft4.1?户界?，表明仪器与电脑连接成功，进?下?步操作。

③新建程某某：单击菜单栏中“项?”，创建新的程某某。或者调?已保存的PCR程某某模板?件，运?程某某。

④若创建新程某某，点击创建项?。设置PCR基本参数、?件名、反应体系、操作者等。

⑤设置实验程某某，温度循环设置按试剂盒说明书中“循环参数设定”设置（如图）。

循环参数设定

步骤温度时间循环数

1逆转录50℃10min1cycle

2预变性95℃5min1cycle

3变性95℃10s

40cycles 退?/延伸/检测荧光55℃40s

说明：

A、步骤3中55℃时设置荧光检测。

B、在勾选基因通道时需要填写检测信号（管1，在此处可以填写检测基因信号或者1,2,3,4）

点击保存，保存我们所创建的新程某某。

⑥在界?左下?点击Home，实验Home界?提供了多种进?实验向导的??，?户点击实验向导。

⑦更改?件名、操作者，勾选模块，基因通道默认为我们所设置的，如需要可勾选全通道扫描。

⑧“孔某某编辑”设置样品孔某某，根据我们样品数设置孔某某，点击右下侧的样本项?，进?样本类型的更改，设置阴阳对照。

⑨反应条件全部设好后，打开仪器蓝?滑盖，放?样品，盖某某?，点击“实验运?”，再点击开始，即可开始运?程某某。停?程某某，暂停程某某。运 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 过程操作不规范等，请严格按照说明书操作。因拭?等样本采集过程及病毒感染过程本?的特点，可能存在采集到的样本量不?等原因带来的假阴性结果，

应结合临床其他诊疗信息综合判断，必要时复测。

8.7待检标本和试剂盒及废弃物有潜在传染性，应严格遵守消毒隔离制度。

8.8实验操作后应?即去除?套，?清洁液洗?。7.9避免标本溅出，污染环境。

8.10每次实验完毕，必须作?次性严格消毒。

8.11不能使?过期试剂。

8.12流感检测试剂必须保存在2℃～8℃环境中。7.13移液器应经常校正。

?持性?件

9.1《新型冠状病毒感染的肺炎实验室检测技术指南》9

质量记录

10.1检验原始记录。

10.2检验报告

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