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测定酚氧化酶蛋白含量及活性实验报告

一、实验目的：

掌握酶标仪的原理和操作方法；

掌握考马斯亮蓝G-250染色法测定蛋白质原理和操作方法。

二、实验原理：

考马斯亮蓝能与蛋白质的疏水微区相结合，这种结合具有高敏感性。考马斯亮蓝G-250的磷酸溶液呈棕红色，最大吸收峰在465nm。当他与蛋白质结合形成复合物时呈蓝色，其最大吸收峰改变为595nm。考马斯亮蓝G250-蛋白质复合物的高消光效应导致了蛋白质定量测定的高 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 250试剂、酚氧化酶样品、去离子水

五、实验操作：

梯度设定标准蛋白浓度测定标准曲线；

设定测定组为空白组、标样1、标样2、标样3、标样4、标

样5、未知样，每个实验组三个重复；按加样量表顺序向酶标板A1-C7孔依次添加牛血清蛋白标准液、去离子水、考马斯亮蓝G-250；

放入酶标仪，在595nm波长下读取吸光值。

六、实验结果：

标准曲线：

测得的酚氧化酶样品的蛋白含量为 0.5334 mg/mL;

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