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PCR 实用技巧：七大方法消除引物二聚体

相信很多人一听到引物二聚体的时候都会很愤怒，因为几乎我们每个人都受到过它的折磨。它作为 PCR 的副产物，甚至有时候是主要产物充斥着我们的整个 PCR 实验过程。你在被它折磨的不行不行的时候，你有想过它为什么总是出现在你的实验结果中吗

接下来就让我带大家走进它的世界，了解它，认识它，最后战胜它。

引物二聚体是什么鬼？

引物二聚体其实就是一对引物或者引物自身的 3’ 端部分碱基互补结合，在 Taq 酶的作用下从 3’ 末端延伸所形成的小分子量的双链 DNA 片段。

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引物二聚体是如何形成的？

1）最根本的原因是引物之间或者引物自身 3’ 端部分碱基互补结合

2）模板量过低

3）引物浓度过大

4）引物长度过短

5）退火温度低 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 照就是：模板用 H2O 替代，其他的都一样。这样的话，如果这个泳道有条带出现，那说明形成了引物二聚体（当然前提就是该体系没有被模板污染）。从这里也可以看出设置对照的重要性，一个巧妙的对照往往可以达到事半功倍的效果。

如何消除引物二聚体？

1）重新设计引物，这是解决该问题最根本的办法

2）增加模板用量

3）减小引物浓度

4）引物长度适中

5）提高退火温度

6）减少循环次数

7）可以适当的在 Mix 中添加少量的甘油或 DMSO

最后，希望大家在读了该篇文章后，引物二聚体可以永远离你而去！

最后的最后，给大家补充一个好的点子：基本上消灭二聚体，最核心的注意是

3'尾巴的三个碱基最好不要全部是 G 或 C 组成的

3'尾巴的三个碱基的互补序列不要出现在两条引物序列里

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