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PCR基础理论知识汇报人：刘慧日 期：2021/07/26目录/CONTENTS010203PCR基础理论PCR实验室检测PCR相关拓展与补充Mullis模拟体内核酸合成过程,每变性、退火、延伸三个步骤为一个循环对靶核酸进行扩增为PCR的体外扩增提供合适的条件与环境PCR的发展PCR原理及过程PCR扩增体系01.PCR基础理论PCR(Polymerase Chain Reaction)，即“聚合酶链式反应”，是为了解决在体外特异性地扩增某个基因的问题，从而满足对核酸的体外研究和应用。

自从1953沃森和克里克发现了DNA结构以来，人们对核酸的研究逐步深入，但核酸的来源限制了核酸的研究。1985年由Mullis首次提出了PCR技术，通过模拟体内核酸合成过程，快速方便地获得大量特异性拷贝的核酸片段，突破了核酸的原料限制，使生命科学领域的研究手段发生了革命性的变化。随后，核酸体外扩增技术飞速发展，新技术层出不穷。除了对靶核酸进行定性检测外，还可以对起始靶核酸的数量进行检测，除了直接扩增靶序列外，还可以通过扩增或放大与靶序列结合的探针序列或信号达到检测靶序列的目的。

如：Q-PCR、连接链式反应、分支DNA等。PCR的发展即模拟生物体内DNA的复制过程，在体外（试管内）通过酶促反应合成特异DNA片段，由变性、退火、延伸三个步骤构成。原理将温度降低至寡核苷酸引物的熔点温度以下(40~70°C)，则引物与互补的单某某DNA模板互补结合，形成杂交链②退火待扩增的靶DNA片段在高于其熔点温度(Tm)的条件下(94~95°C )，DNA双螺旋结构中的氢键断裂而解螺旋，形成两条单某某分子，这两条单某某分子即为扩增反应的模板。①变性将温度升至72°C，根据碱基互补配对的原则，dNTP按照模板链的序列加至引物的3'端，在DNA聚合酶存在的条件下，杂交链不断延伸，形成新的DNA双链。③延伸PCR原理及过程通常为要复制的核酸片段（靶核酸），其来源可为基因组DNA、RNA、质粒DNA或线粒体DNA。模板1是dATP、dCTP、dGTP、dTTP四种脱氧核苷三磷酸的混合物。浓度应一致，以免增加错配率。脱氧核苷三磷酸（dNTPs）3最常用的DNA聚合酶为taq DNA聚合酶，是一种耐热DNA聚合酶，在PCR扩增中起到5’→3’延伸的作用，但缺乏核酸外切酶活性，无校正功能。DNA聚合酶4为化学合成的两条寡核苷酸链，决定了PCR产物的特异性。引物的位置、长度、碱基分布、Tm值都将影响扩增反应。引物2为PCR提供最适反应条件。包括氯化钾、硫酸铵或其他一价阳离子。这些离子会影响DNA变性和退火温度以及酶活性。缓冲液 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 析，即多重扩增。优势1①比普通的PCR仪多了荧光信号采集系统和计算机分析处理系统。

②在普通PCR反应体系的基础上加入了荧光基团，利用荧光信号累积实时监测整个PCR反应进程。

区别2RT-PCR（实时荧光定量PCR）(一)分枝杆菌核酸检测

(二)乙型肝炎病毒核酸定量检测

(三)人MTHFR基因分型检测(一)TB利福平耐药突变检测

(二)β-地中海贫血基因检测PCR荧光探针法 法感谢观看2021[文章尾部最后300字内容到此结束,中间部分内容请查看底下的图片预览]

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