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2020.7.17 实验记录

PCR实验

实验目的：掌握pcr的实验过程，以及操作的注意事项。

实验器材：离心机 鼠尾DNA组织 ep管 加样枪 核酸染料 琼脂糖凝胶 TEA溶液等

实验步骤：

首先取出所需要的DNA试剂放于ep管盒中

将引物与mix放置于带冰的盒中。利用mix和所需要引物及水配置mis

mis组成：320ulmix 64ul上游引物 64ul下游引物和64ul的水

配置过程中一定要选择正确的引物，否则会对实验结果造成影响

Pcr所需要的反应体系为20ul 所以可以适当的多配一点避免样品量不够。

在制成mis液后，要先进行离心处理再加入ep管中。

每个反应的ep管中，mis液为16ul，而另外4ul为样品 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 l，在加入的过程中，注意EB管与操作人的距离，注意管中的液体不要洒出，该液体具有强烈的致癌性，千万注意。

混匀后，将溶液沿着角倒入模具中，缓慢匀速倒入，不要将液体全部倒入，要留存部分液体。冷却半个小时

若模具中存在气泡，要将气泡赶到角落中，避免影响实验结果。

拿出梳子，取出凝胶，置于电解液中，电解液要全部侵泡凝胶。

再取出凝胶，第一个孔某某maker，后八个孔某某样品液。之后每隔八个加一次maker，注意间距的把握。

每个孔某某的样品液是7ul，而每次7ul取maker时，所用的maker要加俩个孔，避免马克瑞过多而溢出。

在150v的电场条件下进行电泳，电泳时间大约为半个小时。

对电泳后的凝胶进行观察，记录实验结果。

实验结果：所有的的样品都为阴性，实验失败

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