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Transwell

实验原理: 根据细胞在含有不同浓度血清的小室内的渗透多少来检测细胞的迁移

实验材料: transwell板，24孔某某，0.1%结晶紫，移液管，黄、枪头，移液枪，记号笔，纸巾，废液缸，计数板，计数器，15ml离心管培养基，甲醇，PBS, 胰酶，模型培养基，40％FBS+培养基,FBS-培养基(培养基中需按比例加双抗)，

实验准备: 1. 细胞培养基、PBS、胰酶，水浴锅水浴30min

2.transwell板，24孔某某，15ml离心管，移液管，记号笔，纸巾，黄、蓝某某，移液枪，计数板，上样槽，计数器，废液缸紫外照射30min

实验操作: 1.取24孔某某标记，分别设置(12，24，36 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 到各梯度时间后，向第一孔中加入1ml PBS，将transwell板放入其中，清洗1~2次吸取第二孔中细胞液，倒置于纸巾上5min

7.向孔中加入1ml甲醇，固定20min,加入PBS清洗2~3次，之后拿出trandwell板，用棉签擦去内室细胞，风干4，5h

8.0.1%结晶紫1ml室温下染色15min

9.pbs水洗2~3遍，风干，显微镜观察

注意事项：小室全程轻拿轻放，不要刮蹭到小室底部的膜。

小室回收：

用棉签轻轻擦拭小室底部背面穿过膜的细胞。胰酶（600ul）浸泡过夜。

去离子水清洗，晾干，加无水乙醇(1000-600ul)浸泡过夜.

紫外消毒6h.

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