以下为《几丁质酶、淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶活性。》的无排版文字预览，完整格式请下载

下载前请仔细阅读文字预览以及下方图片预览。图片预览是什么样的，下载的文档就是什么样的。

几丁质酶、淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶活性。

1.1 胶态几丁质的制备

称取20g粉状几质（美国sigma公司产品）产品,加入800mL于4℃下预冷的浓盐酸中,置于37℃水浴摇床上(100r/min)振荡1-2h,直至几丁质全部溶解。倒入8L预冷的47.5%乙醇(去离子水配制)中,4℃静置过夜。次日将混合液离心(8000R/min，10min），去上清。用大量去离子水反复洗涤沉淀至PH值为中性。每次洗完后于8000R/min，10min离心收集沉淀。最后,用500mL去离子水重新悬浮沉淀,得到的即为胶态几丁质。制备好的胶态几丁质立即使用,或贮藏于4℃冰箱中备用。

1.2 N一乙酞氨基葡萄糖标准曲线的绘制

称取1.0gN一乙酞氨基葡萄糖（N-NAG）(北京欣经科生物***产品)，溶解后用容量瓶定容至1000mL，制成浓度为1.0mg/mL的母液。用该母液配制得到N-NAG浓度分别为0、20、40、60和80ug/mL的梯度溶液。吸取0.5mL各梯度溶液于一只洁净离心管中,加入0.1mL浓度为0.8mol/L四硼酸钾溶液(PH9.1)。摇匀后,沸水浴中反应3min,迅速用冰水冷却至室温,再加入3mL制备好的1%对二甲氨基苯甲醛(DMAB)试剂,并在37℃下保温20min。之后自来水冷却至室温。用分光光度计测定各反应体系在585nm下的吸光值。以N一乙酸氨基葡萄糖浓度为横坐标,A585nm为纵坐标做出标准曲线。采用线性回归分析方法求得该曲线的回归方程。

1.3 几丁质酶活力测定

吸取0.5mL霉培养物滤液于一只洁净5mL离心管中。加入0.5mL胶态几丁质乳化液。将离心管置于37℃水浴中反应4h。然后8000R/min，5min离心终止酶促反应。吸取0.5mL上清液,按照介绍1.2的步骤测定上清液中的N一乙酞氨基葡萄糖浓度,以此计算出几丁质酶的活力单位。在上述酶促反应体系中,1mL酶液每小时释放出1umol N·乙酞氨基葡萄糖定义为一个酶活力单位(U)。

2、蛋白酶活性的测定

采用透明圈法测定蛋白酶的活性。所用的培养基为明胶琼脂培养基。培养XX霉后,往平板中倒入酸性升汞溶液（15%HgCl2，2mol/L HCL）染色。其基本原理：明胶是胶原蛋白水解的产物,主要成分为蛋白质,升汞与明胶结合产生乳白色混浊物。明胶被蛋白酶分解后混浊消失,出现透明圈。透明圈的大小与蛋白酶活性成正相关。,。

在PDF平板的一侧接种活化的霉菌丝块(直径5mm)。于20℃下培养3d后,在同一培养皿的另一侧接种活化的核盘菌菌丝块（直径5mm）。继续在20℃下培养。待核盘菌产生的菌核被XX霉寄生致腐后(20d),选取大小比较一致（直径4mm）左右的菌核。测定其中的蛋白酶活性。具体方法为：将被寄生的核盘菌菌核放在GA平板中央,每个平板放1粒菌核。将培养皿置于37℃下培养3d。用酸性升汞溶液浸没各平板,以显现菌核周围的透明圈。用直尺测定各平板上的透明圈直径。共测定5粒菌核,作为5次重复

3、 纤维素酶活测定

3.1 DNS 试剂配制：准确称取 3,5-二硝基水杨酸 6.3 g，先加约 600 m L 蒸馏水进行溶解，再依次加入 Na OH 20 g，酒石酸钾钠 182 g，待溶解后加入重蒸苯酚 5 g，Na2SO3 5 g，搅拌溶解待冷却至室温后定容至 1L，分装于棕色瓶中并放置一周后标定使用。

3.2 葡萄糖、对硝基酚标准曲线测定

（1）葡萄糖标准曲线测定：首先将葡萄糖在 105℃烘箱中烘干至恒重，然后配制成 1mg/m L 的葡萄糖标准液。在 25 m L 带塞试管中依次加入 0 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 ）。

样品测定：取若干10 mL具塞比色管编号，分 别加入1 mL酶液（20 mmol · L-1 磷酸盐缓冲液稀释） 和1 mL 1%淀粉溶液，55 ℃恒温水浴反应10 min， 置于冰水浴2 min终止反应，然后加入3 mL DNS试 剂，混匀，沸水浴中煮沸 10 min，取出冷却至室 温，取2 mL反应液用蒸馏水定容至10 mL，以蒸馏 水代替酶液为空白，540 nm处测定吸光度，计算酶 活力。酶活力计算公示： β-淀粉酶活力（U · mL-1）= E×hn ×5 式中，E-样品溶液吸光度；n-样品溶液稀释 倍数；5-2 mL 反应液换算成 10 mL 倍数；h-标准 曲线斜率。

[文章尾部最后300字内容到此结束,中间部分内容请查看底下的图片预览]

以上为《几丁质酶、淀粉酶、纤维素酶和蛋白酶活性。》的无排版文字预览，完整格式请下载

下载前请仔细阅读上面文字预览以及下方图片预览。图片预览是什么样的，下载的文档就是什么样的。