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酵母菌的纯培养

上节课中果酒、果醋的发酵利用的是果皮和空气中的野生酵母菌和醋酸菌。这样的发酵方式效率较低，而且在最开始的时候其他杂菌也在繁殖可能产生一些有害的副产物（如甲醇），影响果酒、果醋的品质。在发酵液中接种相应的微生物是提高发酵效率方法之一。此次的实验我们将借助基本的微生物培养技术分离纯化果酒中的酵母菌。

实验材料 ：

土豆、葡萄糖、琼脂、天平、蒸馏水、纱布、1L的烧杯、500 ml锥形瓶、棉塞、电热炉、培养皿、带塞试管、旧报纸、橡皮筋、高压蒸汽灭菌锅、酒精灯、打火机、酒精喷壶或酒精棉、自制发酵酒或甜酒水、接种环、移液枪、记号笔、恒温培养箱、血细胞计数板（选用)、超净工作台(选用）。

1、配制培养基

将100g土豆加400 ml水煮沸20分钟，纱布过滤。再加入10 g葡萄糖、10g 琼脂，溶解后加水定容至500 ml，配制成土豆培养基。将培养基的一部分分装到用于保藏菌种的试管中，占试管体积的1/3即可(选做），其余的倒入锥形瓶中，将试管和锥形瓶塞上塞子。

3、灭菌

将培养基、培养皿、试管用旧报纸包裹起来，移液器吸头装入吸头盒。将这些耗材放入高压蒸汽灭菌锅中，在加压100Okpa、121C的条件下加热15分钟灭菌。灭菌结束后将耗材取出，等待冷却，其中装有培养基的试管应倾斜放置，待冷却后制成斜面保藏培养基。

图1斜面保藏培养基

4、倒平板

先对双手和桌面喷洒70~75%酒精消毒，待酒精挥发后点燃酒精灯，等培养基冷却到放到手背上感觉不烫的时候，开始倒平板。用左手拿起一套培养皿，中指托住下皿，食指和大拇指扣住上盖。右手拿锥形瓶在酒精灯火焰上掠过后，用左手小拇指拔下棉塞，将瓶口和培养皿口在火焰上掠过，然后用大拇指将培养皿的上盖打开一个小口，将培养基从开口处倒入培养ⅢL(图2)。培养基铺满培养皿底部后，再次灼烧培养皿口和锥形瓶口，合上培养Ⅲ，塞上瓶塞，将培养皿放在桌面上，接着开始倒下一个平板，至少倒3个。

图2倒平板

5、平板划线法接种

将接种环在酒精灯上灼烧，冷却的过程中摇匀自制酒。用接种环蘸取一环自制酒，另一只手取一个平板，将皿口掠过火焰后，打开培养皿，用蘸有自制酒的接种环在培养基上划出3条平行线(图3〉，注意不要将培养基划破。再次灼烧接种环，冷却后从第一次划线的末端开始第二次划线，稀释菌液。重复四到五次，注意最后一次的划线不要与第一次相连。接种完成后在培养皿底部做好标记。

图3平板划线

6。培养及观察

将培养皿放入28°C的恒温培养箱中倒置培养48 h(图4） 。倒置培养是因为如果培养基在下面，水蒸气会凝结在皿盖上，滴下的水会破坏菌落原有的形态，影响实验结果。培养结束后观察菌落形态(图5），记录在实验报告上。

图4倒置培养

图5培养皿底部标记示范及菌落形态

7。保藏菌种(选做)

一只手拿起长有单某某的平板，再取一支斜面保藏培养基夹在这只手的无名指和小拇指之间，灼烧接种环后，打开培养皿盖，用冷却的接种环挑取一个单某某。在火焰上掠过培养皿口和试管某某，合上培养皿，用另一只手的小拇指拔下棉塞，将菌种成s形划在斜面培养基上，灼烧管某某塞上棉塞（图6) 。在28℃恒温培养箱中培养24 h，长出菌落后（图7）放在冰箱中保存。

图6斜面接种

图7培养好的保藏菌种

讨论

(略）

实验报告

(略）

第一章微生物的纯培养和显微技术

培养物(culture):在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。

纯培养物(pure cu1ture) :只有一种微生物的培养物。

一、无菌技术

无菌技术:在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其它微生物污 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 养条件，其二可用抑制其他微生物生长繁殖的选择性培养基或培养条件。如用于增殖好氧性自生固氮菌的Ashby无氮培养基，增殖土壤真菌用的Martin培养基等。其三可用连续培养法，在一定稀释率下，使比生长速率小的细胞溢出培养器，而比生长速率大的细胞留在培养器中。

六、二元培养物

●纯培养物:只含有一种微生物的培养物叫做纯培养物。

●混合培养物:含有两种以上微生物的培养物叫做混合培养物。

●二元培养物:培养物只含两种微生物，并有意识保持两者之间的特定关系的培养物为二元培养物。

●例如寄生于细菌细胞内的病毒与细菌一-起培养。对于病毒来说，二元培养物是在实验室控制条件下可能达到的最接近于纯培养的培养方法。

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