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菌落总数(公共用品用具微生物)的测定方法验证报告方 法 验 证 报 告  /   公共场所集卫生检验方法 第4部分：公共用品用具微生物GB/T 18204.4-2013(3)                

方法验证报告

1.目的 验证平皿计数法测定公共场所细菌总数指标，来判断在本实验室此方法的适用性。 2.方法内容 2.1 培养基与试剂 2.1.1生理盐水成分： 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000mL 制法：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，分装到试管内，每管10mL，121C高压灭菌15 min。 2.1.2营养琼脂成分：  蛋白胨 10g  牛肉膏 3g  氯化钠 5g  琼脂 10g~20g  蒸馏水 1000 mL  制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器内,经103.43 kPa (121 ℃ ，15 lb)灭菌20 min，储存于冷暗处备用。 2.2 仪器和设备 2.2.1高压蒸汽灭菌器。 2.2.2干热灭菌箱。 2.2.3恒温培养箱：36 ℃士1 ℃。 2.2.4冰箱。 2.2.5电炉或微波炉。 2.2.6天平：感量0.1g。 2.2.7涡旋混合器。 2.2.8无菌试管 、平皿(直径9 cm)、刻度吸管等。 2.2.9灭菌棉拭子。 2.2.10灭菌剪刀。 2.2.11pH计或精密pH试纸。 2.2.12放大镜或(和)菌落计数器。 2.3检验步骤 2.3.1样品的稀释：将放有采样后棉拭子的试管充分振摇，此液为1 : 10的样品匀液。用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL生理盐水稀释液试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1 : 100的样品匀液。按同法制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释1次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。 2.3.2样品的接种:根据 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。 2.5.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 2.5.5若所有稀释度(包括液体样品原某某)平板均无菌落生长，以小于1乘以最低稀释倍数计算。 2.5.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30 CFU~300 CFU之间，其中一部分大于300 CFU或小于30CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。 2.6结果报告  公共用品用具细菌总数的测结.定果按式(2)得出。 N×b A= ……………………………..（2） /k 式中： A— 细菌总数测结.定果； 3

方法验证报告 / N—平板平均菌落数,单位为CFU；  b—稀释倍数；  k—根据采样面积、标准限值单位得出的系数。 3.方法验证结果 3.1空白实验 对灭菌蒸馏水7次做细菌总数的测定，所得结果如下表： 表1 空白试验结果 /3序号 样品分析编号 平皿菌落数 结果（CFU/m） 1 灭菌蒸馏水-1 0 未检出 2 灭菌蒸馏水-2 0 未检出 3 灭菌蒸馏水-3 0 未检出 4 灭菌蒸馏水-4 0 未检出 5 灭菌蒸馏水-5 0 未检出 6 灭菌蒸馏水-6 0 未检出 7灭菌蒸馏水-70未检出 3.2样品测试 对样品分别做7次细菌总数的测定，所得结果如下表： 表2 样品测试结果 /3序号 样品分析编号 平皿菌落数 结果（CFU/m） 1 ***W010101 5 2 ***W010201 8 3 ***W010301 4 4 ***W010401 6 65 ***W010501 8 6 ***W010601 7 7 ***W010701 6根据以上测试结果得知，蒸馏水灭菌后测得结果均为阴性，根据以上测试结果得知，空白测得结果均未检出，样品的测的结果为6，因此本实验室的3CFU/m环境和仪器、试剂均符合标准的要求。 4.结论 经验证，本实验室已具备开展该方法测试所需的仪器设备并已达到相关仪器检定标准，相关操作人员技术成熟，分析结果准确。相对偏差、相对标准偏差满足标准要求。表明本实验室已具备开展该方法进行测试的能力。 

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