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菌落总数(公共用品用具微生物)的测定方法验证报告方 法 验 证 报 告  /   公共场所集卫生检验方法 第4部分：公共用品用具微生物GB/T 18204.4-2013(3)                

方法验证报告

1.目的 验证平皿计数法测定公共场所细菌总数指标，来判断在本实验室此方法的适用性。 2.方法内容 2.1 培养基与试剂 2.1.1生理盐水成分： 氯化钠 8.5g 蒸馏水 1000mL 制法：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，分装到试管内，每管10mL，121C高压灭菌15 min。 2.1.2营养琼脂成分：  蛋白胨 10g  牛肉膏 3g  氯化钠 5g  琼脂 10g~20g  蒸馏水 1000 mL  制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4~7.6，分装于玻璃容器内,经103.43 kPa (121 ℃ ，15 lb)灭菌20 min，储存于冷暗处备用。 2.2 仪器和设备 2.2.1高压蒸汽灭菌器。 2.2.2干热灭菌箱。 2.2.3恒温培养箱：36 ℃士1 ℃。 2.2.4冰箱。 2.2.5电炉或微波炉。 2.2.6天平：感量0.1g。 2.2.7涡旋混合器。 2.2.8无菌试管 、平皿(直径9 cm)、刻度吸管等。 2.2.9灭菌棉拭子。 2.2.10灭菌剪刀。 2.2.11pH计或精密pH试纸。 2.2.12放大镜或(和)菌落计数器。 2.3检验步骤 2.3.1样品的稀释：将放有采样后棉拭子的试管充分振摇，此液为1 : 10的样品匀液。用1 mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于盛有9mL生理盐水稀释液试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1 : 100的样品匀液。按同法制备10倍系列稀释样品匀液，每递增稀释1次，换用1次1 mL无菌吸管或吸头。 2.3.2样品的接种:根据对样品污染状况的估计，选择1个~2个适宜稀释度的样品匀液，在进行10倍递增稀释时，每个稀释度分别吸取1 mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1 mL稀释液加入两个无菌平皿作空白对照。 2.3.3样品的培养：及时将15 mL~20 mL冷却至45 ℃~50 ℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46 ℃士1 ℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿，并转动平皿使其混合均匀。琼脂凝固后，将平板翻转，36 ℃士1 ℃培养48 h士2 h。 2.4菌落计数 2.4.1可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量(CFU)。 2.4.2选取菌落数在30 CFU~300 CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30 CFU的平板记录具体菌落数，大于300 CFU的可记录为多不 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 4 ***W010401 6 65 ***W010501 8 6 ***W010601 7 7 ***W010701 6根据以上测试结果得知，蒸馏水灭菌后测得结果均为阴性，根据以上测试结果得知，空白测得结果均未检出，样品的测的结果为6，因此本实验室的3CFU/m环境和仪器、试剂均符合标准的要求。 4.结论 经验证，本实验室已具备开展该方法测试所需的仪器设备并已达到相关仪器检定标准，相关操作人员技术成熟，分析结果准确。相对偏差、相对标准偏差满足标准要求。表明本实验室已具备开展该方法进行测试的能力。 

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