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第2章 微生物的纯培养和显微技术

一、要点提示

1. 由于微生物个体微小，在绝大多数情况下对微生物的研究、利用都是使用其群体，后者是在一定条件下培养、繁殖得到的微生物个体集群，称为培养物。如果培养物仅由一种微生物组成，就被称为纯培养物。一般情况下只有纯培养物才能提供可以重复的结果，因此从混杂的天然微生物群中分离获得某特定的微生物纯培养，是研究和利用微生物的最重要的环节之一。而在分离、转接及培养微生物纯培养时防止其被环境中其他微生物污染并避免培养物自身污染环境的无菌操作技术是进行微生物学研究的基础，并广泛地被其他学科和生产实际所利用。

2. 很多细菌、真菌和单细胞藻类在固体培养基表面或内部形成可以形成相互分离的单某某，稀释倒平板法、稀释涂布平板法、平板划线法以及稀释摇管法是分离获得这些微生物纯培养的常用方法。液体培养分离法或单细胞（孢子）分离法在某些条件下也可被用于分离微生物的纯种，而包括富集培养技术在内的选择培养法可通过设定有针对性的培养条件来提高特定微生物纯培养的筛选效率。

3．微生物个体微小，通常必须通过显微镜才能观察到其个体形态，而进行显微观察时，分辨率和反差是决定显微观察效果的两个最重要的因素。它们与显微镜的特性有关，也取决于样品的制备与观察技术。无论是光学显微镜还是电子显微镜，其设备和技术发展迅速，应用面越来越广泛和深入。

二、 重点、难点剖析

1. 无菌技术是最基本的微生物学实验操作技术，最重要的是建立无菌概念，并正确而严格地按实验教材和实验课的要求，掌握在各种情况下的具体应用原则和操作规范。

2. 分离获得某特定的微生物纯培养，是研究和利用微生物的基础。获得纯培养的方法有固体培养基分离、液体培养基分离和单细胞挑取三大类（表2－1），其中用固体培养基获得单独的微生物菌落是最常用、最基本的方法。此外，由二种相互之间具有特定关系（例如寄生或捕食）的生物组成的二元培养物有时也是微生物纯培养的一种形式，如利用宿主培养病毒，或利用被作为食物的细菌来培养原生动物等。

表2-1 获得纯培养的方法比较

方法

特点

应用



固体培养基分离

稀释倒平板法

菌落分离较为均匀，进行微生物计数结果相对准确。但操作相对麻烦，热敏感菌有时易被烫死，而严格好氧菌也可能因被固定在培养基中生长受到影响。

这三种方法可用于所有能在固体培养基表面形成菌落的微生物的纯培养分离。并且，通过选用适当的选择平板及培养条件，可直接分离各种具有特定生理特征的微生物。而和厌氧罐或厌氧手套箱技术结合，这三种方法也可用于获得各种厌氧菌的纯培养。





涂布平板法

操作相对简单，是较常使用的常规方法。但有时会因涂布不均匀使某些部位的菌落不能分开，进行微生物计数时需对稀释和涂布过程的操作特别注意，否则不易得到准确的结果。







平板划线法

操作简单，多用于对已有纯培养的确认和再次分离。







稀释摇管法

稀释倒平板法的一种变通形式，但由于菌落形成在琼脂柱的中间，观察和挑取都相对困难。

在缺乏专业的厌氧操作设备的情况下对严格厌氧菌进行分离和观察。



液体培养基分离

稀释法

工作量大，是否获得纯培养需依靠统计学的推测。

不能或不易在固体培养基上生长的微生物进行纯培养分离或数量统计。





富集培养

一般不能直接获得微生物的纯培养，在通过富集培养使原本在自然环境中占少数的微生物的数量大大提高后，需再通过平板法进行相应微生物纯培养的分离和检测。

1）根据某种微生物的特殊生长要求，按照意愿从自然界中对这种微生物进行有针对性的有效分离；2）分离 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 。同时仪器体积较小，价格也相对便宜。





原子力显微镜

利用细小的探针对样品表面进行恒定高度的扫描，同时通过一个激光装置来监测探针随样品表面的升降变化来获取样品表面形貌的信息。







4.样品制备和显微观察也是微生物学的基本操作之一，应按实验教材和实验课的要求，掌握在各种情况下微生物样品制备和显微观察的基本原理和操作规范，了解各微生物类群在显微镜下的基本形态特征。

本章作业

1. 为什么说Koch等建立的微生物纯培养技术是微生物学建立与发展的基石？一般可用哪些方法获得微生物的纯培养？

2. 你认为样品制备和显微观察中（光镜和电镜）应通过哪些方法改变样品的反差以

改善观察效果？

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