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野外大型真菌识别、标本采集和室内分离

一、目的与要求

1、掌握野外标本采集的方法和注意事项

2、认识常见的大型真菌。

二、实验原理

大型真菌以夏秋多雨时的七、八月份出现最多（春季发生的菌类比较少，仅盘菌目中的羊肚菌、马鞍菌和丛某某等多发生于春末），所以此时采集标本最为适宜。担子菌门是一群多种多样的真菌，约1.6万某某。其特征：①菌丝具横隔，有单核菌丝和双核菌丝（又称初生菌丝和次生菌丝），担孢子萌发时形成单核菌丝，单核菌丝接合，核不结合而形成双核菌丝。双核菌丝时期相当长。②形成担子、担孢子，在此过程中有锁状连合。担子菌分为四纲：①层菌纲Hymenomycetes，如银耳、木耳、灵芝、蘑菇等。②腹菌纲Gasteromycetes，如马某某、鬼笔等。③锈菌纲。④黑粉菌纲。

泰山常见药用蕈菌有：茯苓Poria cocos (Schw.) Wolf.、灵芝Ganoderma lucidum (Leys. ex Fr.) Karst．、蜜环菌Armillaria mellea (Vahl. ex Fr.) Kummer．、脱皮马某某Lasiosphaera fenzlii Reich.、猪苓Polyporus umbellatus (Pers.) Fr.、雷某某Polyporus mylittae Cook. et Mass.、猴头菌Hericium erinaceus (Bull. ex Fr.) Pers.、云芝Coriolus versicolor (Fr.) Fr.、银耳Tremella fuciformis Berk、木耳Auricularia auricular (L. ex Hook.) Underw．、紫芝Ganoderma japonicum (Fr.) Lloyd．、大马某某Calvatia gigantean (Batsch ex Pers) Lloyd.、紫色马某某C. lilacina (Mont. et Berk.) Lloyd.等。

野外调查和标本采集是事物分类学研究不可缺少的部分，也是系统学研究的基础。通过野外工作，澄清区系物种多样性的物种组成和生态学价值，也为生物资源的可发和利用提供基础资料。

中国目前已知的各类大型真菌估计有3万多种，其中食药用菌接近1000种，人工开发利用的约100种左右。特别是一些有益的野生真菌，很多仅局限于对野生子实体进行疯狂采挖阶段，难以进行人工栽培，半人工的栽培利用也少见，达不到永续利用的目的，对大型真菌野生资源的开发研究势在必行，而对野生真菌的采集和分离培养是野生真菌资源开发的第一步，是十分基础而又重要的工作。

三、材料和用品

平底背筐、平底手提筐、纸盒若干个（或铝盒、小指管若干个，塑料袋若干个）、木箱1～2个、液浸标本筒1～2个、采集刀、锤子、凿子、手锯、掘根器，刨根器、相机、GPS、刻度尺、钢卷尺，湿度计，温度计，pH试纸，采集袋、纸袋、白纸、小纸盒、放大镜、复印纸、记录本、记号笔、号牌、线或细绳、皮筋、空平培养皿、卫生纸（包裹部分标本用）

四、实验方法与步骤

1、设定大型真菌采集的时间：一般选择春末夏初，或夏末秋初，采集时间定在雨后2-3天，这时采集的菌类较干燥，但不老化萎缩，有利于菌类的分离。对于 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 到一天，再倒扣放置培养，一发现培养基上有菌丝生长，立即转管培养，原理是：孢子通过弹射后很容易掉入培养基中，而杂菌因粘着力不能脱离菌褶上。这种方法要求子实体新鲜，采集到分离最好不超过2小时，一方面可保证菌褶能黏附于菌盖上，另一方面可保证其上杂菌不易脱离。

（2）菌肉厚实的菌类的分离：这些菌类一般较易分离，分离一般采用组织分离法。

（3）耳类等胶质菌分离法：要注意几个方面：1）对于菌肉厚实的菌类可直接取子实体内部的菌肉组织，但要多部位挑取菌肉组织，每个部位多做几个培养，以提高菌种成活率。2）很多的菌类菌肉薄，菌柄中空或易遭虫害，则采用与胶质菌类相同的实验方法进行组织分离，尽可能挑取子实体的干净部位，用0.2%的升汞作表面消毒，消毒时间视组织块的厚薄而定，一般30秒到2分钟即可，消毒后用灭菌的蒸馏水多洗几次，当然次数越多越好（一般3-5次〕，目的是把残留的升汞溶液洗干净，或稀释掉；细菌是不可能去的太干净，只有通过在培养基内加入相应的抗生素抑制其生长，根据实验经验，加入的抗生素的量要比推荐剂量稍微大一点才行。3）培养过程中要随时观察，对于产生附有霉菌的组织块要随时剔出，尽可能在没有产生孢子前去除，以免影响其他菌块的生长。并注意随时进行转接生长的菌种，防止在后期被污染。

（4）平伏型菌类的分离：主要是一些非褶菌类，一般紧贴与基质上生长，难以采用组织分离法分离，孢子产生于表面，少且杂菌含量多，对于这类菌的分离采用基质分离法合适。具体方法是：先将要材料表面消毒，分离器具消好毒，用镊子和解剖刀将材料表面的平伏子实体除去，在子实体生长部位（子实体去除处）取黄豆大小的基质，接入合适培养基中，放入培养箱中培养既可，这种方法鉴定很重要，获得杂菌的可能性较大。

5、分离菌种的初步鉴定：判定生长的菌落是否就是分离菌株的菌种需要丰富的真菌知识，一般来讲，大型真菌的菌落一般很少产生无性孢子（极少数种类除外）；丝状，毛某某，有的形成菌丝束，爬行于菌落表面和管壁；胶质菌类菌落有些特殊，有的菌丝不发达，气生菌丝少或没有。表面呈现粉末状，菌落带各种鲜艳的颜色的一般为霉菌，细菌菌落多脓状；大型真菌生长一般较慢，而霉菌生长快，这也是一个判定依据；肯定不是的要及早清除，对于实在不能判定的则通过分子方法进行鉴定。

分离工作注意事项：

（1）不同的菌类有不同的生长习性，与其熟悉的野外条件相比，人为的培养条件（培养基，生物因素和环境因素）等发生了很大的变化，因而萌芽时间，菌丝生长速度均会有所不同，一些菌类，萌芽的时间可能长些，生长的速度可能很慢，对没污染，也没生长的菌类组织不要过早抛弃。

（2）有的菌类，当有细菌污染时，能加速菌丝的萌发和生长，对于仅有细菌污染的分离平板，一般不主张过早抛弃，有的真菌向外移动的速度快于细菌，容易分开，实在不行，也可用抗生素来抑制细菌的生长，从而纯化真菌。

（3）特定的真菌分离应多查资料，考虑培养基和培养条件，做好充分准备，避免因后期工作不足而前功尽弃，大型真菌采集不易，新鲜子实体保存很难，时间长了，易失去再生活性，同时对分离工作造成很大困难。

五、实验报告与作业

1、野外标本采集要注意哪些事项？

2、对于不同的野生蕈菌如何优化分离菌种？

3、写出常见的蕈菌中文名称及其拉丁学名。

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