小鼠主动脉操作流程

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主动脉树:

(1)称重,3%戊巴比妥钠麻醉小鼠,用针头固定于取材板(可透水)。

(2)用湿润的纱布块将小鼠的胸腹部毛发湿润。

(3)剪开前胸部皮肤,去除胸骨及整个胸廓,暴露整个腹腔与胸腔。

(4)灌流,50ml注射器取10ml 4℃预冷的PBS溶液(高压灭菌),先在右心耳剪开小口,输液针头刺入左心室(心尖部),同时,缓慢均匀推注PBS液,直至流出的液体清亮。后继续用另外的50ml注射器取10ml(或更多些)4%多聚甲醛溶液。(注意:分生组织仅用高压灭菌PBS溶液灌流组织)

(5)灌流结束后,将肺逐叶从蒂部剪去,胸腔仅剩心脏、胸腺与主动脉,在心底上方简单分离。

(6)在显微镜下仔细并迅速分离主动脉树包含主动脉弓直至髂动脉分支处,剥除外膜脂肪,从脊柱上仔细游离整条主动脉树后,在主动脉树与脊柱间垫一塑料片(以助血管拍照时平直)。

(7)在主动脉树拍照完毕后,在体剖开小鼠血管置于4%多聚甲醛中固定。固定大于 内容过长,仅展示头部和尾部部分文字预览,全文请查看图片预览。 近的脂肪组织,同时保持主动脉外膜完好无损。在这一步,没有形态学上可定义的组织标识符来区分外膜和邻近的脂肪组织(图1)。然而,脂肪组织很软,可以很容易地去除;主动脉外膜很紧。

分离主动脉弓→髂总动脉分叉处。建议刚开始做的时候深麻醉小鼠,保证还有心跳,剖开胸腔后,可以往心脏打生理盐水,能看见心脏下 贴近脊柱的一根血管有明显液体向下的流动痕迹,那这条就是主动脉→腹主动脉了,前面的血管可以分离开剪断。确定贴近脊柱的那条,这里分离血管建议你淘宝买专用的不锈钢显微剪和显微镊 最小规格的就行,显微镊是真的好用!就这样一步步的分离,慢慢剪掉黏膜就大功告成了!(tips:从心脏附近的胸主动脉往下分离,同时要注意清除外膜周围的脂肪组织等;剥除时一定要小心,防止扯断动脉;胸主动脉紧贴脊柱,覆盖胸膜,较易剥离,但是上段三个分叉处有很多组织,以及腹主动脉包埋于肌肉间,较易弄断,可以使用浸润的棉签轻柔剥离动脉附着组织)

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