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淀粉糊化度分析方法

原理简介: β-淀粉酶在适当的PH值和温度下，能在一定的时间内，将糊化淀粉转化成还原糖及β-糊精，转化的糖量与淀粉的糊化程度成比例。用铁氰化钾法测其还原糖量，即可计算出淀粉的糊化度。

仪器和设备

1.1 分析天平：感量0.1mg

1.2 恒温水浴锅：可控温度40±1℃

1.3 定性滤纸：中速

1.4 碱式滴定管：25ml（刻度0.1ml）

1.5 移液管：2ml、5ml、15ml、25ml。

1.6 玻璃漏斗：φ6cm

1.7 容量瓶：100ml。

试剂与溶液

2.1磷酸盐缓冲液10%（V/V）（PH=6.8）

甲液：溶解71.64g磷酸氢二钠于蒸馏水中，并稀释至1L。

乙液：溶解31.21g磷酸二氢钠于蒸馏水中，并稀释至1L。

取甲液49.0ml和乙液51.0ml合并为100ml，再加900mL蒸馏水即为10％（V/V）磷酸盐缓冲液。

2.2 β-淀粉酶溶液 60g/L

溶解6.0gβ-淀粉酶（PH＝6.8，40℃时活力大于8万单位，细度为80％以上通过60目）于100ml 10％磷酸盐缓冲液中成乳浊液。（β-淀粉酶贮存于冰箱内，现用现配）

2.3 硫酸溶液 10%（V/V）

将10ml浓硫酸用蒸馏水稀释至100ml。

2.4 钨酸钠溶液 120g/L

溶解12.0g钨酸钠于100ml蒸馏水中。

2.5 碱性铁氰化钾溶液 0.1mol/L

溶解32.9g铁氰化钾和44.0g无水碳酸钠于蒸馏水中并 内容过长，仅展示头部和尾部部分文字预览，全文请查看图片预览。 瓶内）。最后用蒸馏水定容至100ml，并贴上标签。

3.5 摇晃容量瓶，静置2min后，用中速定性滤纸过滤。留滤液作为下面测定试样。

3.6 用5ml移液管分别吸取上述滤液5±0.05ml，放入洁净的150碘量瓶中，再用15ml移液管加入15±0.05ml碱性铁氰化钾溶液，摇匀后置于沸水中准确加热20min后取出，用冷水快速冷却至室温，用25ml移液管缓慢加入25±0.1ml醋酸盐溶液，并摇匀。

3.7 用5ml移液管加入5±0.05ml碘化钾溶液摇匀，立即用硫代硫酸钠溶液滴定，当溶液颜色变成淡黄色，加入几滴淀粉指示剂，继续滴定到兰色消失。各三角瓶分别逐一滴定，并记下相应的滴定量。

3.8 结果计算

所测试样糊化度α(%)，按下式计算：/

α= ×100

式中：P—空白滴定量，ml；

m—完全糊化样品溶液滴定量，ml；

n—样品溶液滴定量，ml

3.9 精密度

每个试样取平行样进行测定，以其算术平均值为结果。

双试验的相对误差：糊化度在50%以下时，不超过10%；糊化度在50%以上时，不超过5%。

注意事项：

a. β-淀粉酶在贮存期间内会有不同程度失活，一般每贮藏三个月测一次酶活力。

为了保证样品酶解完全，以酶活力8万单位，酶用量300mg为准，如酶的活力降低，酶用量则按比例加大。

b. 在滴定时，指示剂不要过早加入，否则会影响测结.定果，同一样品滴定时，应在变成一样的淡黄色时加入淀粉指示剂。

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